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Dilution et concentration d'un prélèvement de surface

Posté par
Kimi28
16-02-21 à 19:19

Bonjour à tous,

Je dois réaliser un rapport de stage sur la validation des nettoyages au sein d'une entreprise.
Je dois prélever et doser les traces de détergent avec une méthode fournisseur (un système coloré biphase)
J'essaye de mettre en place une méthode de prélèvement par écouvillon sur différentes surface plastique ou inox.
J'ai préparé une "gamme étalon" de détergent de 15ppm, 20ppm , 50ppm
Ensuite on m'a fourni un gabarit de 100cm2.
Je voudrais créer un échantillon de concentration connue 50ppm pour prouver que mon prélèvement avec écouvillon fonctionne bien .
On m'a expliquer que de déposer sur 100cm2 revient à faire une solution au 1/100.
J'ai donc fabriqué une solution à 2.5% de détergent, j'ai ensuite déposé 2ml de cette solution sur mon gabarit de 100cm2. Je dois attendre que ça sèche et je prélève avec mon écouvillon. Afin d'extraire les résidus je dépose mon écouvillon dans 10ml d'eau.

Les résultats montre que dans l'échantillon il y a 500 ppm de détergent au lieu de 50ppm...  soit 10 fois plus que ce que je voulais obtenir donc je ne comprends pas où est mon erreur s'il vous plaît ?
L'erreur est-elle dans les 2ml ou dans la dilution finale des 10ml d'eau ?

Posté par
gts2
re : Dilution et concentration d'un prélèvement de surface 16-02-21 à 19:50

Bonjour,

Cela n'est pas évident...

"On m'a expliquer que de déposer sur 100cm2 revient à faire une solution au 1/100."
C'est l'expression exacte ? Parce que j'ai du mal à comprendre ce que cela veut dire.

Comment avez-vous calculé les 50 ppm attendu ?
Vous parlez d'étalon de détergent 15 ppm ... ce sont des étalons de spectro ?

Posté par
Kimi28
re : Dilution et concentration d'un prélèvement de surface 16-02-21 à 21:15

Tout d'abord je vous remercie pour votre réponse
Alors on m'a dit précisément pour mon calcul de concentration : " que de déposer sur 100cm2 revient en gros à diluer dans 100ml " ( je n'ai pas très bien compris pourquoi d'ailleurs )

Donc pour mon calcul j'ai fait :

Objectif 50ppm dans mon tube de 10ml Donc il y a une dilution 1/10eme
Alors sur la plaque il faut 500ppm (500ppm=0.05%)
0.05 % --> 2ml déposés
?              --> 100ml ( équivalent de 100cm2)
Produit en croix = 2.5%
Donc j'ai déposé 2ml d'une solution de 2.5% de detergent
Ensuite ce n'est pas du spectro c'est uniquement une observation visuelle de dégradé de rose
Dans un tube j'ai uniquement 10ml d'échantillon ( pour les étalons j'ai 10ml de solution à 15ppm , 20ppm et 50ppm de détergent )  ensuite j'ajoute de  2ml d'indicateur mixte et 2ml d'un autre réactif et j'obtiens après agitation une phase inférieure verte et supérieure rose

Posté par
gts2
re : Dilution et concentration d'un prélèvement de surface 16-02-21 à 22:11

Le détergent n'est pas du tout volatil ?
Si oui, vous déposez sur la plaque c*2mL que vous récupérez par vos écouvillons que vous diluez dans 10 mL soit c*2/10=c/5, vous êtes passé de 2,25% à 0,5 %.

Le 500 ppm est en (très) dehors de votre gamme donc pas très précis, et 500 ppm cela donne 0,05%, j'ai un facteur 10 mais dans l'autre sens.

"que de déposer sur 100cm2 revient en gros à diluer dans 100ml "

Je ne comprends toujours pas.

Posté par
gts2
re : Dilution et concentration d'un prélèvement de surface 16-02-21 à 22:26

Quel est le but exact : trouver les traces de détergent sur la surface ?
Dans ce cas, ce que vous cherchez est une quantité de matière par unité de surface, et comme cela n'est pas habituel, ils traduisent  par 1 mol/100cm2 équivalent à 1mol/100 mL ?
Mais dans ce cas, c'est juste un problème de présentation qui ne change pas le calcul : conservation de la quantité de matière : ce que vous avez déposé sur la surface va se retrouver dans votre échantillon.

Posté par
Kimi28
re : Dilution et concentration d'un prélèvement de surface 16-02-21 à 22:37

Je ne sais pas comment sait-on si le détergent est volatil ou non ?
Ayant vu que j'etais en dehors de la gamme j'ai effectué un étalon supplémentaire à 500ppm et j'obtiens bien la même couleur que pour l'échantillon avec l'écouvillon ...

Oui le but est bien de retrouver les traces du détergent sur la surface afin de valider la méthode de prélèvement avec un écouvillon . Je pense effectivement que d'après leur explication 1mol/ 100cm2 = 1mol/ 100ml.

Posté par
gts2
re : Dilution et concentration d'un prélèvement de surface 17-02-21 à 07:38

Pour la volatilité, c'était juste pour savoir si on n'en perdait pas pendant l'évaporation.

Ensuite, je ne suis pas sûr que vous allez tout récupérer : soit l'écouvillon est petit, et dans ce cas, je ne suis pas sûr qu'on peut tout prélever, soit il est gros et dans ce cas lors de la mise en solution, il va en rester dessus.

Posté par
Kimi28
re : Dilution et concentration d'un prélèvement de surface 17-02-21 à 17:44

J'ai effectué de nouveau la manip aujourd'hui avec l'aide d'une microbiologiste habituée à ce type de prélèvement pour de l'hygiène.  Elle m'a expliqué que mon erreur venait du fait que je pensais faire une dilution en déposant mon écouvillon dans 10ml d'eau après le prélèvement alors que non puisque je pars d'un échantillon sec.
Mais afin de simplifier la manip elle m'a recommandé de déposer uniquement 1ml

Donc cela revient uniquement à dire qu'il me faut 50ppm/100cm2

Donc pour cela je dépose 1ml d'une solution à 5000 ppm (soit = 0.5%)  de détergent sur les 100cm2
Et après l'observation des résultats nous retrouvons bien les 50ppm que nous nous étions fixés pour une surface lisse.
Nous possédons des écouvillons spécifiques pour la validation des nettoyages et la recherche de trace de produit chimique.
Je vais maintenant effectuer la suite de mes analyses pour trouver sur quelle surface j'ai le meilleure rendement de récupération.
Je vous remercie pour votre aide et l'intérêt porté à mon problème.

Posté par
gts2
re : Dilution et concentration d'un prélèvement de surface 17-02-21 à 19:17

Bonjour,

L'important est que vous soyez arrivé à ce que vous vouliez.
Même si je ne comprends pas comment la quantité de matière contenue dans 1 mL à 5000 ppm peut donner 10 mL à 50 ppm.

Posté par
Kimi28
re : Dilution et concentration d'un prélèvement de surface 17-02-21 à 20:39

Malheureusement je suis incapable de l'expliquer...
Il ne faut pas prendre en compte les 10ml
Il faut juste prendre en compte les 100cm2

C'est très flou pour moi aussi ... je ne comprend pas comment ça fonctionne ... mais d'après les résultats c'est bien ça et cette façon de procéder et valable aussi en microbiologie ( avec un écouvillon spécifique à la microbio )
En gros lorqu'elle dépose 1ml d'une solution concentrée de 1000 germes sur les 100cm2, après le prélèvement avec l'écouvillon il y a que 10 germes qui pousse sur la boîte de pétrie  

Posté par
gts2
re : Dilution et concentration d'un prélèvement de surface 17-02-21 à 21:12

Citation :
Il ne faut pas prendre en compte les 10ml, Il faut juste prendre en compte les 100cm2


Et donc avec 100 cm2=100 mL, cela marche. Ok  (même si c'est un peu flou)



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