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absorbance
Bonsoir, j'ai un TP concernant la spectrophotométrie et j'ai un problème concernant une question. On a les spectres d'absorption en fonction de la longueur d'onde des chlorophylles a et b et la question consiste à expliquer pourquoi on choisit le point 682 nm comme longueur d'onde spécifique des chlorophylles totales et pourquoi on choisit 682 nm au lieu de la longue d'onde 450 nm.
J'ai remarqué que ce sont à ces deux longueurs d'onde que les spectres d'absorbance se croisent, c'est donc à ces points que l'absorbance est constante peu importe les concentrations en chlorophylle a et b. Le problème est que je ne sais pas pourquoi on choisit 682 nm plutôt que 450nm : est-ce parce qu'il y a un léger déphasage entre les courbes à 450nm?
J'ai lu des choses sur internet à propos de cela, disant que 682 nm représente le point ibostatique ou isostatique de ces chlorophylles mais je n'ai pas compris grand chose.
Pouvez vous m'aider svp ?
Bonsoir
En présence de 2 substances colorés, on se place en général à la longueur d'onde correspondant à l'égalité des deux coefficients d'absorption si on cherche à mesurer la somme des deux concentrations.
Si on cherche à mesurer les deux concentrations, on fait des mesures aux deux longueurs d'onde correspondant aux maximum d'absorption des deux substances.
Difficile d'en dire plus sans connaître les objectifs de ce TP.
il s'agit de trouver la teneur en pigment chlorophylliens dans un des feuilles de pois. C'est pour cela qu'on a les courbes d'absorbance des 2 chlorophylles a et b. Je ne comprends pas pourquoi on choisit spécifiquement 682 nm pour alors que les 2 coefficients d'absorption sont également égaux à 450 nm, puisque les courbes d'absorption s'y croisent également.
Il n'y a aucune raison théorique de choisir une longueur d'onde plutôt que l'autre. Peut-être une raison pratique : les chlorophylles ont un coefficient d'extinction nettement plus élevé à 450nm (3,5 fois plus élevé environ). Travailler à 682nm permet d'utiliser des concentrations plus élevées sans craindre de faire saturer le spectrophotomètre.
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