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Etalonnage

Posté par
Selimhabibi
05-06-22 à 23:11

Bonjour,
Est ce que la loi de beer lambert nous permet d'avoir l'absorbance nette ou brute
Exemple si la prof me donne les absorbances nette de part le graphique
Et qu'elle me donne les absorbances nette dans un tableau
Et quelle me demande quelle est la masse de la substance presente dans la fraction F3 ( ayant par exemple comme absorbance nette 0,31 et absorbance brute de 0,41)
Alors je dois utilisé l'absorbance brute ou net pour calculer la masse de cette substance ( bien sur en utilisant la concentration et la longueur de la cuvette aussi)
Merci davance

Posté par
vanoise
re : Etalonnage 06-06-22 à 11:16

Bonjour
Selon ton cours, quelle est la différence entre absorbance brute et absorbance nette ?

Posté par
Selimhabibi
re : Etalonnage 06-06-22 à 14:00

Absorbance brute est celle mesuree par le pectrophotometre
Par exemple si ja les mesures suivantes

AB                AN
0,021          0
0,031            0,010
0,042             0,021
0,062              0,041
AB pour Absorbance brute
AN pour Absorbance nette
Absorbance brute sont les mesures des differences solutions par le spectrophotometre et Absorbance nette cest la soustraction de AN1- AN1
AN2-AN1
AN1 je pense quil sagit du blanc dans ce cas en fait

Posté par
vanoise
re : Etalonnage 06-06-22 à 14:07

C'est effectivement cela. La question est tout de même bizarre car la grande majorité des spectrophotomètres (la totalité des appareils modernes) permettent de "faire le blanc" : un bouton d'étalonnage permet d'obtenir l'affichage A=0 lorsque la cuve est remplie de solvant incolore de sorte que l'absorbance mesurée ensuite est l'absorbance nette qu 'on appelle tout simplement l'absorbance, notée le plus souvent "A".

Posté par
Selimhabibi
re : Etalonnage 06-06-22 à 14:10

Du coup si je comprends bien dans la formule je dois utiliser l'absorbance nette ?

Posté par
Selimhabibi
re : Etalonnage 06-06-22 à 14:17

En fait, ici la prof nous donne les absorbances nettes sur le graphiques? Car si je vois bien la F1 a une absorbance de 0,12 du coup normalement son absorbance nette devrait etre de 0? Sur le graphique ? Ou en fait le graphique cest absorbance nette et le tableau avec les fractions cest absorbance brute?
Et du coup est ce que pour determiner la masse de la fraction 3 je dois utiliseres donnes du tableau ou du graphique ?

Etalonnage

Posté par
Selimhabibi
re : Etalonnage 06-06-22 à 14:19

Car en fait Elle reconnect un autre exercice et Elle demande de calculer la masse de fraction 6 en ajoutant le tableau ci et en plus l'absorbance de F6
Et reprecise quil sagit des absorbances nettes
Du coup le tableau correspond au absorbance nette ? Parce que si cest le cas IL ny a pas d'absorbance nulle est ce normal ?

Posté par
vanoise
re : Etalonnage 06-06-22 à 14:58

Si la droite d'étalonnage A=f(c) est une droite passant par l'origine du repère, il s'agit bien de l'absorbance nette puisque A=0 si c=0.

Posté par
Selimhabibi
re : Etalonnage 06-06-22 à 15:01

Oui je comprends pour le grahique quil sagit de l'absorbance nette
Cependant je parle du tableau que represente ces Absorbance vu quel sont differentes de labsorbance nette du graphique
Et du coup est que dans la question avec la masse je dois utiliser labsorbance du graphique ou labsorbance dans le tableau

Posté par
Selimhabibi
re : Etalonnage 06-06-22 à 15:28

En fait je vais etre plus precise dans ma question
Une purification est réalisée sur une colonne Dowex-50. 10 mL de l'extrait enzymatique est déposé sur la colonne puis celle-ci est lavée par du tampon Tris-HCl 13 mM de pH 8.2. L'éluat est collecté dans des tubes qui sont changés toutes les 2 minutes. Un total de 5 fractions (F1 à F5) sont collectées. Chaque fraction a un volume de 1,5 mL.
Une droite d'étalonnage est établie à partir d'une solution d'α-amylase à 1 mmol/mL. Les solutions étalons sont préparées dans un volume minimal de 1mL aux concentrations suivantes : 0 mM, 10 mM, 20 mM, 50 mM et 100 mM.

L'absorbance est ensuite lue au spectrophotomètre à 280 nm dans des cuvettes. La droite d'étalonnage est réalisée à partir des solutions étalons. Les résultats sont présentés dans le graphique et le tableau ci-dessous. Les résultats sont donnés en absorbance nette.
Graphique detalonnage de l' alpha amylase a 280nm
Et en plus Elle nous donne le tableau que je vous ai deja envoyé
Et la question de l'enoncé est celle ci
Calculez la masse d'α-amylase présente dans la fraction F3. Exprimez votre réponse en mg avec 2 décimales.

Etalonnage

Posté par
vanoise
re : Etalonnage 06-06-22 à 15:47

Les concentrations de ton dernier message sont utiles uniquement pour tracer la droite d'étalonnage. Pour la solution F3, l'énoncé précise : A=0,41. Il te suffit de trouver, à partir de la droite d'étalonnage, à quelle concentration correspond une absorbance de 0,41. Ensuite, connaissant le volume de l'échantillon et la masse molaire...
Une chose est sure : une fois le "blanc" effectué, on raisonne uniquement sur les absorbances nettes que l'on appelle d'ailleurs le plus souvent "absorbance puisque l'absorbance brute n'est pas étudiée.

Posté par
Selimhabibi
re : Etalonnage 06-06-22 à 15:59

En fait voila jai repondu a la question et jaimerai bien que vous corriger
Est ce que la Bonne reponse est la 1 ou la 2 ?

** image supprimée ** les recherches doivent être recopiées **

Posté par
Selimhabibi
re : Etalonnage 06-06-22 à 21:35

Voila en fait jai compris vanoise
Je suis desolee car cetait tres compliqué pour vous de me comprendre( car je n'arrivais pas a me faire comprendre )
Pourtant vous avez quand meme essayer de m'expliquer
Jai une autre question (jai trouver pour finir la reponse pour la question cest 1660 mg )
Jai une autre question comment je peux determiner la masse presente dans le volume totale d'extrait enzymatique
Si vous savez m'aiguillez un peu ce serait super
Merci vrmt pour votre aide

Etalonnage

**image tournée et recadrée **

Posté par
vanoise
re : Etalonnage 07-06-22 à 12:07

Sans énoncé complet, difficile pour moi d'être certain de la réponse attendue... Ne faut-il pas tout simplement exploiter l'indication :
A=1,81 pour l'extrait enzymatique ?



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