Niveau master

Calcul du nombre de mol de NADH consommées par mole de pyruvate

Posté par
lucille344 21-12-20 à 12:04

Bonjour,

J'ai effectué un tp en enzymologie qui consiste à étudier la réaction de transformation du phosphoenol pyruvate (PEP) en pyruvate par la pyruvate kinase.
Cette réaction est étudiée à l'aide d'une réaction enzymatique auxiliaire couplée qui fait intervenir la LDH, c'est la cinétique de disparition du NADH que l'on suit. L'une des premières questions est le calcul du nombre de mole de NADH consommées par mole de pyruvate. Nous avons lors de ce tp mesuré l'absorbance en fonction du temps donc nous avons les valeurs de A pour chaque volume de PEP ajouté , nous avons le coefficient d'extinction molaire du NADH et à partir de cela j'ai calculé la concentration en micromolaire/ min grâce à la loi de beer lambert ( A= epsilon* l*c). C'est donc à cette étape que je bloque, je ne vois pas comment trouver le nombre de mole de NADH consommées par mole de pyruvate. Faut-il procéder à une différence et ensuite convertir en nombre de mole? Je vous remercie par avance , bonne journée.

_{* > lucille344, profil non à jour *}

Posté par re : Calcul du nombre de mol de NADH consommées par mole de pyr 21-12-20 à 12:46

Bonjour,

Enoncé à préciser : la deuxième réaction est rapide ?
Autrement dit, pour nous aider, traduire votre protocole par deux équations (symboliques !) en indiquant la réaction donc vous suivez la cinétique et la réaction suffisamment rapide pour la considérer comme totale lors de la mesure au spectro.
Et indiquer bien sûr si je suis complètement à côté de la plaque.

Sinon, comme vous faites une étude cinétique, on ne peut faire le tri entre un avancement x un coeff. stoech et (x',') donnant le même n=x=x''.

Posté par re : Calcul du nombre de mol de NADH consommées par mole de pyr 21-12-20 à 14:02

Voici les deux équations, la deuxième est considérée comme rapide, on la considère comme totale. Autre chose à préciser la réaction s'effectue dans un volume finale de 3mL

** image supprimée **

Posté par re : Calcul du nombre de mol de NADH consommées par mole de pyr 21-12-20 à 14:32

Donc si je comprends bien la deuxième équation est plutôt
pyruvate + n NADH -> et on cherche n ?

Sinon avec votre écriture, la réponse est immédiate : c'est 1.

Avec le protocole exact, cela serait plus simple :
- Je suppose que la quantité de NADH est fixée dès le début en excès.
- Vous dites que vous avez UNE valeur de A pour chaque ajout de PEP : vous attendez que tout soit consommé ? Mais alors comment suivre la cinétique ?
- Sinon en oubliant pour le moment la cinétique, je suppose que vous connaissez la quantité de PEP ajouté et donc de pyruvate formé, et vous connaissez la variation de concentration de NADH, donc la quantité de NADH consommé : c*V, n est alors le rapport entre les deux.

Mais je ne comprends pas tout à votre protocole.