Bonjour, je bloque sur un calcul pour mon compte rendu de tp de biochimie. Le but de ce tp était de trouver la quantité de protéines dans le jaune et le blanc d'oeuf pour 100g. Ceci en mesurant l'absorbance des 2 échantillons (blanc d??uf et jaune) dilué par 10 et en les reportant sur une gamme étalon. Aucun problème pour cela j'ai trouvé:
Blanc d'oeuf dilué = 0,555g
Jaune d'oeufdilué = 0,455g
La dilution (on met 200µg d'échantillon dans 1,8mL d'eau) est de 10 soit:
Blanc d'oeuf = 5,55g de protéines
Jaune d'oeuf = 4,45g de protéines
Ensuite il m'est demandé de : calculer la teneur en protéines pour 100 g de blanc d??uf et pour 100g de jaune d??uf.
Données (indiquées sur le tube disponible sur la paillasse de TP) :
Masse blanc d??uf : 31,438 g (Repris dans 1 litre d?eau.)
Masse jaune d'oeuf : 15,956g (Repris dans 1 litre d?eau.)
C'est ici que je bloque puisque de trouve, pour le blanc d'oeuf 88,24g de protéine dans 100g de blanc d??uf ce qui est énorme (sur internet il dise un pourcentage de 10%)
Voici mon raisonnement:
On a 31,438g de blanc d??uf dans 1L. Ici on prend 200µL de blanc soit (200.10-6L x 31,438g/1L) = 6,29.10-3 de blanc d'oeufdans l'échantillon.
(Je pense que mon erreur est là, je n'ai pas bien compris de que voulais dire "repris dans 1litre d'eau").
On a trouvé 5,55mg de protéine dans le blanc dans l'échantillon soit 6,29mg de blanc contient 5,55mg de protéine.
Je mets sur 100g de blanc d'oeuf et je trouve alors 88,235 g de protéine pour 100g de blanc d'oeuf...
Merci d'avance pour m'éclairer sur mon/mes erreurs.
Bonsoir
Préparer une solution en prenant 31,438g de blanc d'œuf, compléter avec de l'eau jusqu'à obtenir un volume de 1L puis prélever 200µL de cette solution : cela revient bien à prélever 6,29mg de blanc d'œuf.
En ajoutant 1,8mL d'eau au 200µL, tu multiplies bien le volume par dix.
En revanche je ne comprends pas bien la procédé de dosage. Le spectrophotomètre te fournis une absorbance A. Peux-tu détailler la méthode qui te permet de passer de la concentration en protéine déduite de la valeur de A à la masse de protéine présente dans l'échantillon de 6,29mg ?
Merci pour votre réponse, voici le tableau des résultats et ci-joint le protocole pour cette partie de tp.
n°Tube | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
Quantité de BSA (mg) | 0 | 0,2 | 0,4 | 0,6 | 0,8 | 1 |
Absorbance (540nm) | 0 | 0,011 | 0,027 | 0,039 | 0,056 | 0,073 |
Ah oui tout s'explique ! Merci beaucoup pour avoir résolu mon problème, je vais donc modifier et recalculer tout ça.
J'ai donc refait les calcules mais je trouve un pourcentage de protéine dans le blanc et le jaune un peu trop élevé... Pouvez-vous me dire si j'ai fait une erreur?
Pour le blanc d'œuf :
On sait donc que l'échantillon a été fait à partir de 31,438g de blanc d'œuf dans 1 litre d'eau. Donc dans les 200µL pris on a (200.10-6x31,438/1)6,29.10-3g de blanc d'œuf dans l'échantillon.
On met donc ces 6,29mg dans 1,8mL (soit un volume total de 2mL) et on a trouvé graphiquement (à l'aide de la gamme étalon) une concentration de protéine égale à 0,555g/L. C'est-à-dire qu'il y a (2.10-3x0,555/1) 1,11.10-3g.
Nous avons donc 1,11.10-3 g de protéines dans 6,29.10-3 de blanc d'œuf soit pour 100g de blanc on a (1,11.10-3x100/6,29.10-3) 17,64g de protéines.
On peut conclure qu'il y a 17,64 % de protéines dans le blanc d'œufs
(Sur internet il y en aurait que 11 pour le blanc et 17 pour le jaune (j'ai trouvé 28% pour le jaune)
Pour contrôler, il faudrait des renseignements précis sur les différentes mesures d'absorbance réalisées, y compris pour la solution étalon.
Voici ci joint les résultats des absorbances (échantillon 1 Bo1 signifie que c'est le blanc d'oeuf non dilué, puis le 1'Bo10 est le blanc d'oeuf dilué par 10.) et de la gamme étalon tracé (la solution initiale de BSA était de 1mg/ml)
Merci
Je crois qu'il y a un gros piège dans cet énoncé si je comprends bien : les solutions étalons son étudiées en ajoutant à 1mL de solution 3mL de réactif se qui correspond à une dilution d'un facteur 4. Or : la mesure se fait en ajoutant à 2mL de solution diluée toujours 3mL de réactif (volume à confirmer), ce qui correspond à une dilution d'un facteur 2,5. Il faut donc tenir compte de ces dilutions différentes dans les calculs et mesures de concentrations...
En tenant compte de mon message précédent et en supposant que la mesure Bo10 a bien été faite à partir de 2mL de la solution diluée auquel a été ajouté 3mL de réactif de Gornall, on arrive à 10,8% de protéine dans le blanc d'œuf (pourcentage massique), ce qui me semble cohérent.
Bonjour caraval
Commence par reprendre le tableau de mesures d'étalonnage du 21-04-21 à 10:47. Les masses indiquées de BSA sont présentes dans un volume de 4mL si on tient compte des 3mL de réactif. Trace alors la courbe représentant les variations de l'absorbance A en fonction de la concentration massique Cm en BSA. Une méthode graphique ou un programme de régression linéaire devrait te fournir l'équation de la droite moyenne :
A=k.Cm avec k à déterminer.
Ensuite, connaissant la valeur de A pour l'échelon Bo10, tu peux obtenir la concentration massique dans cet échantillon et ensuite remonter au résultat recherché.
D'accord oui ça j'ai compris mais je n'arrive toujours pas a trouver le pourcentage massique. Une fois que l'on a la concentration massique pour Bo10, que fait t'on après ?
J'obtiens 0,54g/L pour la concentration massique de Bo10.
d'accord merci je vais essayer de re faire mes calculs
Ne tiens pas compte de mon message de 14h48 : ce sujet m'étais un peu sorti de la tête depuis le 22-04-21 à 00:01 !
Je reprends à zéro. Pour les solutions étalons, prenons l'exemple de la mesure n° 6 : à 1mL de solution à 1g/L, on ajoute 3mL de réactif de Gornall, ce qui revient à multiplier le volume par 4 donc diviser la concentration massique par 4, la ramenant à 0,25g/L. La courbe d'étalonnage est assimilable à une droite de coefficient directeur k=0,280L/g. On peut retenir :
A=0,280.Cm
où Cm est la concentration massique mesurée en g/L.
La solution Bo10 correspond à A=0,038 donc à Cm=0,136g/L
Pour passer de la solution initiale de concentration massique C=31,438g/L de blanc d'œuf, on opère deux dilution successives :
1° : une dilution d'un facteur 10
2° : une dilution d'un facteur 2,5 en ajoutant à 2mL de solution diluée au dixième, 3mL de réactif de Gornall.
La concentration massique en protéine de la solution initiale est donc 25 fois plus grande que dans la solution Bo10 soit :
C'm=25*0,136=3,39g/L
Le rapport (masse protéine)/(masse blanc d'œuf) est donc :
C'm/C=3,39/31,438=0,108 soit 10,8%
Merci beaucoup pour ce dernier message tout c'est éclaircie. J'ai finalement finis par tout bien comprendre !
Oups, je n'ai pas encore tout a fait compris finalement...
Je ne comprend pas comment vous obtener un facteur de 2,5 de dilution en ajoutant 2ml de solution diluée au dixième, 3mL de réactif de Gornall...
De plus, au final on ajoute seulement 1ml de solution dilué dans les 3mL de réactif... Mais n'ayant pas trop compris comment vous obtenez le facteur de 2,5 avec 2mL je ne suis pas sûr de trouver le facteur de dilution pour 1mL (personnellement j'obtiens un facteur de 4 (1ml de solution dans un volume total de 4mL (3mL de réactif + 1mL de sol)).
A ce que j'ai compris :
1° : pour la solution étalon : on prélève 1mL de solution étalon à laquelle on ajoute 3mL de réactif. Pour une même quantité de protéine, on multiplie le volume par 4, ce qui divise la concentration par 4.
2° : pour la solution de blanc d'oeuf : à 2mL de solution diluée au dixième, on ajoute 3mL de réactif. Pour une même quantité de blanc d'oeuf, on fait passer le volume de 2mL à 5mL, ce qui revient à multiplier le volume par 2,5 donc à diviser la concentration par 2,5. Cela fait fait une dilution d'un facteur 25 par rapport à la solution initiale.
Je n'avais pas rajouté une partie de l?énoncé mais on prend 1 ml de la solution dilué au dixième et on ajoute 3mL de réactif.
Cela fait-il bien un facteur de dilution de 4 soit une dilution au total de (4x10) 40?
** image supprimée **ce contenu est à recopier**
Tu as copié dans ton message du 21-04-21 à 10:47 : préparation de l'échantillon :
mettre 1,8mL d'eau avec 200µL de solution de blanc d'oeuf
Cela donne 2mL de solution diluée au dixième. J'ai alors supposé, puisque la cuve peut contenir jusqu'à 5mL que l'on ajoutait 3mL de réactif.
On peut aussi imaginer que l'on jette 1mL sur les 2mL de solution diluée au dixième avant d'ajouter les 3mL de réactif. Cela donnerait effectivement une deuxième dilution d'un facteur 4 donc une dilution d'un facteur 40 par rapport à la solution à 31,438g/L. Cela conduirait à un pourcentage massique de protéine dans le blanc d'œuf de 17,3% et non 10,8%
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